PROTOCOL

ELECTROFORESI

Per preparar el gel (sempre llegint les instruccions especifiques de cada gel):

  1. En un matràs, aboqueu la quantitat de tampó per completar el volum del motlle a omplir amb el gel.
  2. Mesurar la quantitat d’agarosa depenent de la concentració a què es vulgui obtenir el gel. Com més concentració, més resolució. Per exemple, un gel al 2% seria 2 grams d’agarosa en pols dissolts a 100 ml de tampó. La concentració s’obtenen mitjançant la relació pes/volum.
  3. Es procedeix a barrejar l’agarosa amb el tampó i fusionar-ne els components per obtenir el gel. Cal una font de calor com un bany (poc recomanable si es vol rapidesa) a una temperatura que permeti fondre l’agarosa o un microones, que permet fer el procés més ràpidament.
  4. Es refreda el gel per poder abocar-lo a la cubeta. Es poden fer servir les bases que sol treure el kit de l’electroforesi i la pinta que formarà els pouets. En uns minuts, quan es refreda del tot, es té el gel polimeritzat.
  5. Finalment s’introdueix a la cubeta que conté el tampó, a la mateixa concentració que el que s’ha utilitzat per generar el gel.

Per continuar amb l’electroforesi:

  1. Cobrir el gel amb el tampó d’electroforesi. El gel ha d’estar completament submergit.
  2. Posem GELSAFE que son agents intercalants que ens permeten observar el DNA en florescencia posteriorment amb el transiluminador.
  3. Posem en el primer carril marcador de pesos moleculars i dipositem les mostres, que previament haurem barrejat amb el tampó de carrega.
  • Al primer pouet, col·locarem un marcador de pes molecular, és a dir, un “marcador” que ens ajudarà a comparar millor els resultats.
  • En els seguents pouets ficarem les mostres.
  • En els ultims pouets col·lolcarem els controls positiu i negatiu.

4. Tancar la tapa de seguretat i verificar que el gel estigui situat a la direcció correcta.

5. Connectar els endolls amb la font de corrent i realitzar l’electroforesis.

6. Esperar 40 min.

7. Quan hagi passat els 40 minuts, retirem el gel i el suport de la cisterna d’electroforesi.

8. Encenem el transiluminador, apaguem les llums i ens posem les ulleres especials per visualitzar els resultats del gel d’agarosa.